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鉴定知识
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DNA鉴定之PCR-SSOP(SNP分型方法和技术的检测方法)

序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应技术(PCR-sequence specific oligo—nucleotide probing,SSOP)的分析步骤是:先对SNP的多态区域进行扩增,在扩增过程中对PCR产物进行同位素或非同位素标记,然后针对PCR扩增产物根据碱基配对原则设计系列寡核苷酸探针,并将其固定在膜上,最后将PCR严物与膜上的探针杂交、放射自显影,根据信号判断结果。PCR-SSOP分型技术是目前最常用、认可度最高的DNA分型技术之一(Delahunty et a1.,1996)。PCR-SSOP技术具有灵敏度高、特异性强、需样本量少的特点,用于SNP分型主要包括正相SSOP方法和反相SSOP方法两种。前者是将PCR产物固定在膜PCR用标记的探针与之进行杂交;后者是将特异性探针固定在膜上,用标记的PCR产物与之杂交,目前广泛采用的是反相SSOP方法。PCR-SSOP技术由于所用的载体大多为膜或微滴定板,对于复杂而众多的SNP等位基因来说,它不具有集成化的优点,而且洗脱条件比较繁琐,难以实现标准化和自动化。

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